醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)/Southern印跡法

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醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)基礎(chǔ)

基因診斷
- 常用基因診斷技術(shù)
  - Southern印跡法
  - 聚合酶鏈反應(yīng)
  - 擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性
  - 等位基因的特異寡核苷酸探針診斷法
  - 單鏈構(gòu)象多態(tài)性診斷法

基本原理是：硝酸纖維膜或尼龍濾膜對(duì)單鏈DNA的吸附能力很強(qiáng)，當(dāng)電泳后凝膠經(jīng)過(guò)DNA變性處理，覆以上述濾膜，再于其上方壓上多層干燥的吸水紙，借助它對(duì)深鹽溶液的上吸作用，凝膠上的單鏈DNA將轉(zhuǎn)移到濾膜上。轉(zhuǎn)移是原位的，即DNA片段的位置保持不變。轉(zhuǎn)移結(jié)束后，經(jīng)過(guò)80℃烘烤的DNA，將原位地固定于膜上。

Southern印跡雜交示意圖

圖13-6 Southern印跡雜交示意圖

當(dāng)含有特定基因片段已原位轉(zhuǎn)移到膜上后，即可與同位素標(biāo)記了的探針進(jìn)行雜交，并將雜交的信號(hào)顯示出來(lái)。雜交通常在塑料袋中進(jìn)行，袋內(nèi)放置上述雜交濾膜，加入含有變性后探針的雜交溶液后，在一定溫度下讓單鏈探針DNA與固定于膜上的單鏈基因DNA分子按堿基到互補(bǔ)原理充分結(jié)合。結(jié)合是特異的，例如只有β珠蛋白基因DNA才能結(jié)合上β珠蛋白的探針。雜交后，洗去膜上的未組合的探針，將Ⅹ線(xiàn)膠片覆于膜上，在暗盒中日光進(jìn)行放射自顯影。結(jié)合了同位素標(biāo)記探針的DNA片段所在部位將顯示黑色的雜交帶，基因的缺失或突變則可能導(dǎo)致帶的缺失或位置改變。

分子雜交是基因探測(cè)的基礎(chǔ)，除了用印跡雜交外，還有斑點(diǎn)雜交法。即將DNA樣品變性后直接點(diǎn)在硝酸纖維濾膜上，再與探針雜交，或者將細(xì)胞或病毒點(diǎn)在膜上，菌落或菌斑原位地吸附在膜上，經(jīng)過(guò)變性處理，再進(jìn)行雜交。斑點(diǎn)雜交多用于病原體基因，如微生物的基因，但也可用于檢查人類(lèi)基因組中的DNA序列。