組織學(xué)/組織化學(xué)和細(xì)胞化學(xué)術(shù)

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組織學(xué)

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組織化學(xué)（histochemistry）和細(xì)胞化學(xué)（cytochemistry）技術(shù)是通過化學(xué)或物理反應(yīng)原理顯示組織切片細(xì)胞內(nèi)某種化學(xué)成分，進(jìn)行定位、定量及其與功能相關(guān)的研究。如糖類、脂類、酶、核酸等與試劑發(fā)生化學(xué)物理反應(yīng)，形成有色終末產(chǎn)物，在光鏡下觀察，有的可在電鏡下觀察。

1．糖類顯示多糖和蛋白多糖的常用方法是過碘酸－雪夫反應(yīng)（periodic acid Schiff reaction,PAS反應(yīng)）?；驹硎沁^碘酸的氧化作用先使糖分子的乙二醇基變?yōu)橐叶┗笳呃^而與Schiff試劑（無色亞硫酸品紅復(fù)合物）結(jié)合，形成紫紅色反應(yīng)產(chǎn)物（圖1－3）。顏色反應(yīng)的深淺取決于組織內(nèi)多糖的乙二醇分子的多寡。

圖1－3 PAS反應(yīng)原理示意圖

2．脂類脂類物質(zhì)包括脂肪和類脂。標(biāo)本用甲醛固定，冷凍切片，脂類保存較好。多用蘇丹染料、油紅O、尼羅藍(lán)等溶于脂類的染料染色，使脂質(zhì)呈色。也可用四氧化鋨（O_SO₄）染色，脂肪酸或膽堿可使O_SO₄還原為O_SO₂而呈黑色。

3．酶細(xì)胞內(nèi)的酶種類甚多，有氧化還原酶、水解酶、合成酶、轉(zhuǎn)移酶等幾類，目前已有100多種酶組織化學(xué)染色法。酶組化反應(yīng)的基本原理是利用酶對其相應(yīng)底物的水解、氧化等作用，然后再使底物的反應(yīng)產(chǎn)物與某種捕獲劑發(fā)生反應(yīng)，形成沉淀或有色的最終產(chǎn)物，借此檢測該酶在組織切片或細(xì)胞內(nèi)的分布及活性強(qiáng)弱。如細(xì)胞的磷酸酶是一種重要的水解酶，堿性磷酸酶（ALP）和酸性磷酸酶（ACP）在合適的pH條件下可水解有機(jī)磷酸脂。小腸上皮細(xì)胞表面的紋狀緣和腎近曲小管表面的刷狀緣處，微絨毛含有豐富的ALP，與物質(zhì)的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)功能相關(guān)；許多細(xì)胞的溶酶體內(nèi)則含大量ACP，參與細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)代謝。這兩種酶均可以β-甘油磷酸鈉為底物，底物被水解產(chǎn)生磷酸根，再以Ca²⁺、Co²⁺(顯示ALP)或Pb²⁺（顯示ACP）捕獲磷酸根，最后用硫化銨處理，即形成硫化鈷或硫化鉛黑色最終產(chǎn)物，出現(xiàn)在組織切片中該酶存在的部位。因此，酶組化染色不是酶本身的直接顯色，而是酶作用底物的化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)物顯色的。

4．核酸 顯示DNA的傳統(tǒng)方法是Feulgen反應(yīng)，切片先用稀鹽酸處理，使DNA分子中脫氧核糖與嘌呤之間的連接鍵打開，形成醛基，再與Schiff 試劑作用，原理同PAS反應(yīng)，使細(xì)胞核DNA顯紫紅色。還可用甲基綠－焦寧染色法同時(shí)顯示DNA和RNA，這兩種染料都是堿性，甲基綠使細(xì)胞核內(nèi)的DNA呈藍(lán)綠色，焦寧使細(xì)胞質(zhì)和核仁內(nèi)的RNA呈紅色。

圖1－4 免疫細(xì)胞化學(xué)術(shù)示意圖

圖1－5 人呼吸道分離上皮細(xì)胞粘蛋白免疫熒光像

（美國戴維斯加州大學(xué) 吳忍教授供圖）

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