醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)/限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性
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一個(gè)人的兩套單倍體DNA是不完全相同的，一般每100－500個(gè)堿基對(duì)就有一個(gè)是不相同的。換言之，如果把兩套基因組DNA（各3.2×109bp）排列起來，那么平均有1000萬處不同，它們多位于內(nèi)含子序列中。實(shí)際上，除單卵雙生子外，人群中沒有兩個(gè)個(gè)體的基因組DNA是完全相同的。
DNA的多態(tài)性雖可通過DNA測(cè)序檢出，但用限制酶消化卻是最常用的檢測(cè)方法。
1．RFLP由于堿基的變異可能導(dǎo)致酶切點(diǎn)的消失或新的切點(diǎn)出現(xiàn)，從而引起不同個(gè)體在用同一限制酶切時(shí)，DNA片段長(zhǎng)度出現(xiàn)差異（圖13-3），這種由于內(nèi)切酶切點(diǎn)變化所導(dǎo)致的DNA片段長(zhǎng)度的差異，稱為限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（restriction fragmentlength polymporphism, RFLP）。RFLP反映了常見的個(gè)體間DNA核苷酸的可遺傳性變異，它按照孟德爾方式遺傳。RFLP可用Southern印跡雜交法（見下節(jié)）檢出。用Southern雜交檢出RFLP時(shí)，如探針跨越切點(diǎn)，則被切開的兩個(gè)片段均可與探針雜交，從而顯示兩條雜交帶（圖13-4）。
圖13-3 RFLP示意圖箭頭酶切位點(diǎn)；
左圖：等位基因2由于出現(xiàn)新的切點(diǎn)，DNA片段縮至8kb;
右圖：DNA片段電泳后雜交圖
13-4 RFLP的檢出等位基因1因有額外切點(diǎn)而導(dǎo)致產(chǎn)生
兩個(gè)長(zhǎng)短不同的DNA片段（3kb及5kb）且均能與探針雜交
2．兩點(diǎn)RFLP
（1）點(diǎn)態(tài)（point polymorphism）：是由于單個(gè)或少數(shù)堿基的改變引起酶切點(diǎn)的出現(xiàn)或消失所致的RFLP。上述的RFLP即屬于這一類。它們屬經(jīng)典的RFLP。在人類基因組中已發(fā)現(xiàn)數(shù)以百計(jì)的此類多態(tài)位點(diǎn)。
（2）數(shù)目變異的串連重復(fù)（variable number tandem repeats,VNTR）：上述經(jīng)典的單個(gè)堿基取代所致的RFLP一般只能檢測(cè)到一種雜合性的兩種形式，即“有”或“無”某個(gè)限制酶切位點(diǎn)，而且每個(gè)位點(diǎn)在人群中的雜合子頻率通常不會(huì)超過50％，當(dāng)被測(cè)個(gè)體為純合狀態(tài)時(shí)，利用RFLP就無法得到所需要的多態(tài)信息。此外，在整個(gè)基因組中，這類RFLP目前發(fā)現(xiàn)的數(shù)量還有限，并分布不勻。
但是，在人類基因組中還存在一類DNA重復(fù)序列，稱為小衛(wèi)星DNA。它們分布十分廣泛，每一個(gè)單位通常只有16-28bp長(zhǎng)，但其重復(fù)次數(shù)在人群中是高度變異的。當(dāng)用限制酶切割VNTR區(qū)時(shí)，只要酶切點(diǎn)不在重復(fù)區(qū)內(nèi)，就可能得到各種長(zhǎng)度不同的片段（圖13-5）
與小衛(wèi)星DNA不同，另一類重復(fù)序列是衛(wèi)星DNA。它們的基本序列有1－6bp，如（TA）n、(CGG)n等，通常重復(fù)10-60次并呈高度的多態(tài)性。
圖13-5 VNTR導(dǎo)致的RFLP重復(fù)次數(shù)的變異致酶切位點(diǎn)的移動(dòng)和DNA片段長(zhǎng)度的變異
VNTR具有高度的變異性，同時(shí)也是按照孟德爾方式遺傳的，因此是很好的遺傳標(biāo)記，由于它們類型眾多和在基因組中分布廣泛，因而在基因連鎖診斷中應(yīng)用日益廣泛。
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