免疫細(xì)胞化學(xué)
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是將免疫學(xué)基本原理與細(xì)胞化學(xué)技術(shù)相結(jié)合所建立起來(lái)的新技術(shù)，根據(jù)抗原與抗體特異性結(jié)合的特點(diǎn)，檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)某種多肽、蛋白質(zhì)及膜表面抗原和受體等大分子物質(zhì)的存在與分布。肽類與蛋白質(zhì)種類繁多，均具有抗原性，當(dāng)將人或動(dòng)物的某種肽或蛋白質(zhì)作為抗原注入另一種動(dòng)物體內(nèi)，則產(chǎn)生與該抗原相應(yīng)的特異性抗體（免疫球蛋白）；將抗體從血清中提出后，結(jié)合上某種標(biāo)記物，即成為標(biāo)記抗體。用標(biāo)記抗體與組織切片標(biāo)本孵育，抗體則與細(xì)胞中相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合，結(jié)合部位被標(biāo)記物顯示，則在顯微鏡下觀察到該肽或蛋白質(zhì)的分布。用熒光素（常用異硫氰酸）標(biāo)記抗體，并于熒光顯微鏡下觀察，稱免疫熒光術(shù)。如抗體與辣根過(guò)氧化物酶（horse radish peroxidase， HRP）等結(jié)合，進(jìn)行酶顯示后，可在光鏡或電鏡觀察，用于電鏡者則稱為免疫電鏡術(shù)（immunoelectronmicroscopy)此外，以鐵蛋 標(biāo)記抗體白標(biāo)記抗體，稱鐵蛋白標(biāo)記法,也能用于電鏡下觀察?！ ?/p>
標(biāo)記抗體與抗原結(jié)合方式
標(biāo)記抗體與抗原結(jié)合方式主要有兩種：①直接法：用標(biāo)記抗體與抗體中的相應(yīng)抗原直接結(jié)合，操作方法簡(jiǎn)便，特異性高，但敏感性較差，此法可用于檢定未知抗原；②間接法：先用未標(biāo)記的具有特異性的第一抗體與樣品中的相應(yīng)抗原結(jié)合，然后再以標(biāo)記的第二抗體與特異性的第一抗體結(jié)合；第二抗體是用第一抗體作為抗原注入另一動(dòng)物體內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體，然后再結(jié)合以標(biāo)記物。通過(guò)這樣的放大作用，使抗原分子上的標(biāo)記物大大增多，故間接法較直接法的敏感性大為增高，約高5～10倍，故應(yīng)用更為廣泛。間接法中較常用的，如過(guò)氧化物酶-抗過(guò)氧化物酶復(fù)合物法(peroxidase anti-peroxidase complexmethod， 標(biāo)記方法PAP法)，該法除需一抗和二抗外，還需要制備HRP標(biāo)記的抗酶抗體,即以HRP作為抗原免疫動(dòng)物，制成抗HRP抗體，再以HRP對(duì)標(biāo)記該抗體，制成穩(wěn)定的環(huán)形PAP復(fù)合物。標(biāo)本先后經(jīng)一抗、二抗和PAP復(fù)合物處理后再以DAB顯色抗原存在部位可見棕黃色產(chǎn)物?！ ?/p>
免疫細(xì)胞化學(xué)的發(fā)展
近10年來(lái)，免疫細(xì)胞學(xué)技術(shù)有了很大進(jìn)展，各種新方法相繼建立。單克隆抗體 （monoclonal antibody）制備技術(shù)極大地提高抗體的特異性與免疫組化染色的精確性。繼PAP法之后由于生物素-親合素等試劑的應(yīng)用，為檢測(cè)微量抗原、受體、抗體提供了更精確的技術(shù)。目前常用的生物素-親合方法有:標(biāo)記親合素-生物素法(labelled avidin-biotin method LAB法)、橋連親合素-生物素法（bridged avidin-biotin method, BAB法)及親素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物法(avidin-biotin-peroxidase complex method，ABC法)；現(xiàn)市上有配制成的ABC藥盒供應(yīng)，使用簡(jiǎn)便，是目前廣泛應(yīng)用的一種方法。
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