臨床生物化學(xué)/血?dú)夥治鰞x分析方法

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標(biāo)本的收集是極為重要的，若處理不當(dāng)，將產(chǎn)生很大的誤差，甚至比儀器分析的誤差還大，因此必須引起足夠的重視。

血?dú)鈽?biāo)本以采動(dòng)脈血或動(dòng)脈化毛細(xì)血管血為主，靜脈血也可供作血?dú)鉁y定。只有動(dòng)脈血才能真實(shí)反映體內(nèi)代謝氧化作用和酸堿平衡的狀況，對O₂檢測的有關(guān)指標(biāo)必須采集進(jìn)入細(xì)胞之前的動(dòng)脈血，也就是血液中從肺部運(yùn)氧到組織細(xì)胞之間的動(dòng)脈血，才能真正反映體內(nèi)氧的運(yùn)輸狀態(tài)。動(dòng)脈血液的氣體含量幾乎無部位差異，從主動(dòng)脈到末梢循環(huán)都是均一的。

對PCO₂和pH的檢測也以采集動(dòng)脈血為好。血液循環(huán)無障礙的病人，靜脈血的這兩項(xiàng)指標(biāo)基本也可反映體液酸堿狀況。

⒈標(biāo)本采取方法

⑴動(dòng)脈血：肱動(dòng)脈、股動(dòng)脈、前臂動(dòng)脈以及其他任何部位的動(dòng)脈都可以進(jìn)行采血。使用玻璃注射器采血，抗凝劑為肝素鈉。每支肝素鈉每亳升含12500U，相當(dāng)于100mg，用20ml生理鹽水稀釋，分裝成40支，消毒備用（4℃貯存）。臨用時(shí)，注射器吸取肝素鈉溶液一支，而后將肝素液來回抽動(dòng)，使針筒局部濕潤，多余肝素液全部排出棄之，注射器內(nèi)死腔殘留的肝素液即可抗凝。針刺動(dòng)脈血管，讓注射器內(nèi)芯隨動(dòng)脈血進(jìn)入注射器而自動(dòng)上升，取1-2ml全血即可。拔針后，注射器不能回吸，只能稍外推，使血液充滿針尖空隙，并排出第一滴血棄之，讓空氣排盡，將塑料嘴或橡皮泥封住針頭，隔絕空氣，再把注射器來回搓滾，混勻抗凝血，立即送檢。或者采用微量取樣器采集血標(biāo)本。

⑵動(dòng)脈化毛細(xì)血管血：所謂動(dòng)脈化的毛細(xì)血管血就是指局部組織末梢經(jīng)45℃溫水熱敷，使循環(huán)加速，血管擴(kuò)張，局部毛細(xì)血管血液中PO₂和PCO₂值與毛細(xì)血管動(dòng)脈端血液中的數(shù)值相近，此過程稱為毛細(xì)血管動(dòng)脈化。采血部位以手指、耳垂或嬰兒的手足跟及拇趾為宜。用45℃熱水敷局部，5-15min后或直至皮膚發(fā)紅，而后穿刺，穿刺要深，使血液快速自動(dòng)流出，棄去第一滴血。不能擠壓，擠出的血液的測定結(jié)果不可信。未充分動(dòng)脈化的毛細(xì)血管血的PO₂測定值偏低，對pH、PCO₂和HCO₃^－的測定結(jié)果影響不明顯。

用肝素鋰抗凝比肝素鈉好，因?yàn)殇嚭浚?.5％-4.5％）比鈉（9.5％-12.5％）少，可減少血中微纖維形成的可能；同時(shí)可排除了同一樣本測定鈉時(shí)出現(xiàn)錯(cuò)誤的危險(xiǎn)，特別是現(xiàn)在一些儀器將血?dú)馀c電解質(zhì)測定配套進(jìn)行，即一份全血既測定血?dú)庥譁y定鈉鉀氯等電解質(zhì)。

⑶靜脈血：靜脈血所測結(jié)果不適用于了解體內(nèi)O₂的運(yùn)輸狀態(tài)，故PO₂及有關(guān)推算數(shù)據(jù)僅供參考，對pH及PCO₂等酸堿平衡指標(biāo)是適用的。采靜脈血盡可能不使用止血帶。

⒉注意事項(xiàng)

⑴讓病人處于安定舒適狀態(tài)，臥床5分鐘后采血。

⑵在病人進(jìn)行治療過程中采血要特別注意：①若進(jìn)行輔助或人工呼吸時(shí)，采血前至少要等20分鐘，讓其在完全控制自如的人工呼吸狀態(tài)下采血。②若病人進(jìn)行氧氣吸入時(shí)，作血?dú)鉁y定，應(yīng)注意氧氣流量，以備計(jì)算出該病人每分鐘吸入的氧含量。例如病人吸氧速度為6L/min，吸氧器的呼吸循環(huán)純氧氣為3L/min,其余3L為周圍空氣（PCO₂=0.209），因此病人每分鐘得到3L純氧及3×0.21=0.63L來自周圍空氣的氧氣，因此6L總體積中含有3.6L氧氣，含量為60％，此時(shí)PO₂=0.6。③若是體外循環(huán)病人，應(yīng)在血液得到混勻后再進(jìn)行采血。

⑶抗凝劑以肝素鋰為好。對于同時(shí)作血?dú)?、血鈣或血鋰的標(biāo)本，則不能用肝素鋰抗凝，因?yàn)楦嗡乜膳c部分鈣結(jié)合造成誤差，此時(shí)就要用鈣緩沖液肝素試劑抗凝。使用液體肝素抗凝劑濃度為500-1000U/ml為宜，含量過低，抗凝劑體積過大，易造成稀釋誤差；若含量過高也易引起誤差。最好使肝素鋰以均勻分布于毛細(xì)玻管周邊壁上為宜，對標(biāo)本既無稀釋作用又有利于樣品的抗凝。

⑷注意防止血標(biāo)本與空氣接觸，應(yīng)處于隔絕空氣的狀態(tài)。因?yàn)椋孩倏諝庵蠵O₂高（21.17kPa或150mmHg）于血液，PCO₂低（0.040kPa或0.3mmHg）于血液，一旦血液與空氣接觸，大氣中O₂會(huì)從高壓的空氣中進(jìn)入血液，造成血液PO₂高的誤差；CO₂又會(huì)從高壓的血液彌散到大氣中，使血液PCO₂測出結(jié)果偏低。大于標(biāo)本10％的空氣氣泡會(huì)明顯影響PO₂值。②與空氣接觸，易造成空氣污染血標(biāo)本。

⑸標(biāo)本放置時(shí)間：采出的全血中有活性紅細(xì)胞，其代謝仍在繼續(xù)進(jìn)行，O₂不斷地被消耗，CO₂不斷地產(chǎn)生。有報(bào)道標(biāo)本于體外37℃保存，每10分鐘PCO₂約增加1mmHg，pH值降低約0.01單位。血樣于4℃保存1小時(shí)內(nèi)，其中pH、PCO₂值沒有明顯變化，PO₂值則有改變。按要求，采取的血標(biāo)本應(yīng)在30分鐘內(nèi)檢測完畢，如30分鐘后不能檢測，應(yīng)將標(biāo)本置于冰水中保存，最多不超過2小時(shí)，在30分鐘到2小時(shí)之間，血PO₂值是個(gè)懷疑值，僅供參考。

⑹采末梢血須是動(dòng)脈化的毛細(xì)血管血，只有高灌注局部組織的代謝變化，其靜脈血pH、PCO₂、PO₂與動(dòng)脈血所測值才非常接近。

（二）儀器操作簡介

目前使用的血?dú)夥治鰞x生產(chǎn)廠家多，型號(hào)各異，但性能和操作大同小異。現(xiàn)以AVL995血?dú)馑釅A分析儀為例，簡要介紹該儀器的使用方法。

AVL945、995裝有PO₂、PCO₂和pH電極，直接測定全血，實(shí)際上是測定血漿PO₂、PCO₂和pH，因?yàn)檫@些電極直接接觸的標(biāo)本是血漿，而未能伸入到紅細(xì)胞內(nèi)。測出這三個(gè)指標(biāo)后，再通過儀器運(yùn)算出其他指標(biāo)。

⒈啟動(dòng)按儀器要求分別接通主機(jī)和空氣壓縮機(jī)電源，使空氣壓縮機(jī)壓力到達(dá)額定的要求。再開啟二氧化碳氣瓶，使CO₂氣流量達(dá)到額定要求。分別檢查洗滌液、參比液、標(biāo)準(zhǔn)緩沖液1和2等液體是否按要求裝備。

⒉定標(biāo)該機(jī)定標(biāo)分兩種形式，即兩點(diǎn)定標(biāo)和一點(diǎn)定標(biāo)，與其他型號(hào)儀器一樣可進(jìn)行總兩點(diǎn)自動(dòng)定標(biāo)?？們牲c(diǎn)定標(biāo)是先用兩種緩沖液對pH電極系統(tǒng)進(jìn)行定標(biāo)，再用混合后的兩種不同含量的氣體對PCO₂和PO₂電極進(jìn)行定標(biāo)。兩點(diǎn)定標(biāo)是讓儀器建立合適的工作曲線。一點(diǎn)定標(biāo)是每隔一定的時(shí)間檢查一下電極偏離工作曲線的情況。開機(jī)后，兩點(diǎn)定標(biāo)自動(dòng)進(jìn)行是必須做的工作，并且不能中斷。進(jìn)行過兩點(diǎn)定標(biāo)后，儀器每隔12小時(shí)左右再自動(dòng)進(jìn)行下一次兩點(diǎn)定標(biāo)，必要時(shí)可根據(jù)情況任意選用定標(biāo)程序再定標(biāo)。兩點(diǎn)定標(biāo)后，每隔0.5-3小時(shí)，儀器用緩沖液1對pH電極系統(tǒng)進(jìn)行一點(diǎn)定標(biāo)。儀器還進(jìn)行氣體定標(biāo)，先用氣體2(CO₂)對PCO₂電極進(jìn)行定標(biāo)，最后用氣體1（混合氣）對PCO₂和PO₂電極進(jìn)行定標(biāo)。

⒊測量從開機(jī)到兩點(diǎn)定標(biāo)完成后，儀器屏幕上顯示“READY”，即已準(zhǔn)備好，此時(shí)可進(jìn)行測量。一般測量用注射器進(jìn)樣或毛細(xì)管進(jìn)樣兩種方式進(jìn)行。

⑴注射器進(jìn)樣：按Syring（注射器）鍵，轉(zhuǎn)換盤轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位置，用注射器慢慢注入血樣，直到儀器屏幕顯示Measure（測量），下行顯示：拔出注射器，按START鍵。蠕動(dòng)泵開始轉(zhuǎn)動(dòng)，將血樣吸入測量室。當(dāng)血樣到達(dá)pH參比電極時(shí)，蠕動(dòng)泵停轉(zhuǎn)，血樣停留在測量室中，儀器自動(dòng)進(jìn)行測量和計(jì)算。與此同時(shí)，輸入病人Hb量及體溫數(shù)、測出的pH、PO₂值及其計(jì)算值在屏幕顯示，并打印結(jié)果。由于AVL995Hb能自動(dòng)測出病人血紅蛋白值，這種型號(hào)的儀器就可不必另輸Hb值，僅輸入體溫值即可。

測量一結(jié)束，儀器自動(dòng)進(jìn)行沖洗將血樣沖走，干燥后，進(jìn)行一點(diǎn)定標(biāo)，然后返回READY狀態(tài)，又可接著進(jìn)行第二個(gè)樣品的測量。

⑵毛細(xì)管進(jìn)樣：在儀器處于RDADY狀態(tài)時(shí)，按Capillary鍵，轉(zhuǎn)換盤轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位置。在進(jìn)樣口插入裝有血樣的毛細(xì)管，儀器便自動(dòng)把血樣吸入測量室，并停留在測量室自動(dòng)進(jìn)行檢測，以下各種步驟與注射器進(jìn)樣法相同。

⑶微量樣品測量法：當(dāng)采集的血量不足40μl而又多于25μl時(shí)，儀器自動(dòng)進(jìn)行微量樣品測量。進(jìn)樣后，儀器屏幕顯示“微量樣品”，下行顯示“只測pH按1，其余按2”；如果還測pH、PCO₂和PO₂三個(gè)參數(shù)，需按“2”鍵。根據(jù)測量室血樣進(jìn)入的位置交替按“START鍵”和“1”鍵，直至pH測量完。儀器經(jīng)運(yùn)算后，即可打印結(jié)果。進(jìn)行微量樣品檢測時(shí)，一定要按血樣流動(dòng)順序進(jìn)行，認(rèn)真操作，其所測值與全量血樣檢測結(jié)果基本一致。

⑷維護(hù)和保養(yǎng)：按說明書要求，對儀器要定期保養(yǎng)和維護(hù)。特別是對電極的定期保養(yǎng)極為重要。

使用操作人員，一定要熟悉儀器的測定原理、各部件的工作性能，并熟讀說明書，一般的故障應(yīng)該學(xué)會(huì)處理，既大膽又心細(xì)。儀器一旦開機(jī)后，應(yīng)該24小時(shí)連續(xù)開機(jī)使用，充分發(fā)揮儀器的效用，做到物盡其用。